Molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa research usoro

Inyocha ma mata variants na DNA Ọdịdị eji molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa usoro. N'ihi na onye ọ bụla DNA region, nke explores na mpaghara a nke chromosome, site n'usoro ma ọ bụ allele, ụzọ dị iche. Akpata bụla molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa usoro mejupụtara ụfọdụ ma ọ bụ ndị ọzọ aghụghọ nke RNA na DNA. All ndị a ụzọ na-ji nnukwu complexity, na-enweghị laabu ọnọdụ enweghị ike rụrụ, nkpa ga-ukwuu ruru eru. Nke a na-arụ ọrụ a rụrụ na ọtụtụ nkebi.

nkebi

Akpa, RNA ma ọ bụ DNA n'omume-emepụta. Ebe a, a molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa usoro nwere ike etinyere nta ka ọ bụla ihe onwunwe: a dobe nke ọbara, leukocytes, fibroblasts omenala, mucosa (kpụchasịrị), ọbụna ntutu follicles, - DNA nwere ike enwetara site ọ bụla sample. O kwesịrị ekwesị iji ihe ọ bụla molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa ụzọ na ha dị iche iche nhọrọ na ogologo dịpụrụ adịpụ DNA na-echekwara na friji. Nke abụọ ogbo a raara nye ìgwè chọrọ iberibe (amplification) nke DNA, dị ka ọ na-enyere hụ na polymerase ihe mkpalite na vitro (na vitro enweghị aka nke bi organism). N'ihi ya, họrọ DNA papaịrọs ba uba site agbụ ígwè a mmeghachi omume, na ego nke DNA na-abawanye n'ụzọ nkịtị ọtụtụ nde ugboro.

Nzọụkwụ nke atọ na molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa research ụzọ na-ẹkekerede ọtụtụ DNA mmachi (a fragmentation, wepụsịa ma ọ bụ ọnwụ). Mmachi rụrụ site electrophoresis on a polyacrylamide ma ọ bụ agarose jel. Nke a molekụla-mkpụrụ ndụ ihe nketa usoro nke na-amụ DNA ibe akwụkwọ na-enye ohere ka onye ọ bụla buru otu itie ke jel. Mgbe nke ahụ gasịrị, jel-emeso ya na ethidium bromide, ike nke na-adịgide adịgide na DNA, na irradiation na ultraviolet ìhè, mgbe ahụ, ọ bụ omume na-edebe luminescence òkè. Molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa na-achọpụta ọrịa ụzọ dịgasị iche iche na ọtụtụ, ma ndị mbụ nzọụkwụ abụọ na-efekarị niile. Ma iji mata DNA rifọrọ, jel nwere ike acha, na ọtụtụ ndị ọzọ dị na ụzọ.

umu

The kacha na ebe nile ụzọ maka ịchọputa mycobacteria pụrụ ịgụnye n'elu molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa DNA mmụta usoro. Ya kachasi mkpa bụ na, iji mata iṅomi yinye ihe nke kpọmkwem iberibe DNA nke pathogens. Molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa na-achọpụta ọrịa usoro nwebeghị a ọzọ oru oma ụzọ mara ọrịa ndị dị ka ụkwara nta. Iji polymerase ihe mkpalite (PCR), ị pụrụ ijide n'aka na mbụ DNA ga-ịmụba ọnụ ọgụgụ nke mbipụta na a ugboro nde, ya bụ, a ga-amplification, na ọ ga-egosipụta na ya pụta. The uche larịị bụ nnọọ elu - karịrị iri itoolu na ise percent, nke bụ isi uru nke usoro a.

The ike nke molekụla-mkpụrụ ndụ ihe nketa usoro nke nnyocha na irè nke mkpụrụ otutu mbipụta n'ụzọ nkịtị okpukpu abụọ, ebe ọ bụ na nke a bụrụ na drafting sample-egosi a kpọmkwem oligonucleotide usoro mụbara otu narị na ugboro isii. Ọbụna omenala nchoputa nke ụkwara nta nke akụkụ okuku ume usoro budata belata ya uche. Nke a bụ ihe mere oge a na nkà mmụta ọgwụ na-dabeere na molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa ụzọ nke nchoputa nke ụkwara nta. A kọwara usoro bụ irè karịsịa mgbe emeso pathogens nke elu antigenic mgbanwe, chọpụta na ụzọ ọzọ bụ ihe ndị ọzọ siri ike - chọrọ pụrụ iche potassium media ma na-akọ ogologo oge. Biochemical na molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa ụzọ na-emepụta dị nnọọ iche utịp ke pụta.

nchoputa nke ụkwara nta

Marshall PCR nchoputa nke ụkwara nta akacha eji ndị DNA usoro ndị na-kpọmkwem niile anọ na ụdị nke ọrịa. Iji mezuo nke a mgbaru ọsọ na-eji primers na ịchọpụta usoro BỤ ọcha (BỤ-986, BỤ-6110), dị ka ndị a ọcha mara ukwuu migratory umu Mycobacterium ụkwara nta na mgbe nile otutu mbipụta na genome. Ọzọkwa DNA mmịpụta nwere ike rụrụ site ọcha omenala na Clinical (sputum nke ọrịa) site ọ bụla ọzọ kwesịrị ekwesị usoro. Dị ka ihe atụ, e ọganihu usoro ebe lysis echekwa na-eji dabere na guanidine thiocyanate na silica dị ka ụgbọelu DNA. The ọnụ ọgụgụ ndị ọrịa ndị dị iche na ogbenye bacteriological amụba kwa afọ, ya mere na-adakarị omume guzosie ike a kpamkpam dị iche iche larịị nke nzukọ: molekụla-mkpụrụ ndụ ihe nketa usoro nke na-amụ DNA e egwu a isi ọrụ na nchoputa.

Otú ọ dị, anyị ga-ekweta na ọ bụ na-enweghị drawbacks. The PCR usoro bụ ojiji nke na-eweta a na nnukwu ọnụ ọgụgụ ụgha-ezi ihe, na ihe mere abụghị naanị technical njehie, ma atụmatụ nke usoro onwe ya. Ke adianade do, iji usoro a nke nchoputa ikpebi ọganihu nke mycobacteria, nke e kwuru na, na ọ bụ nanị agaghị ekwe omume. Ma nke a mwepu bụ bụghị onye kasị mkpa. Molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa ụzọ nke PCR nchọpụta nsogbu abuana ihe ize ndụ nke ofufe nke mycobacterial DNA. Asambodo chọrọ maka nke a mere na maka PCR laboratories e mere nanị ike, ha na-achọ atọ iche iche ogige. PCR technology bụ oge a na nnọọ mgbagwoju, ọ na-achọ iji ihe ndị kwesịrị ekwesị na ngwá na elu-zụrụ pesonel.

bacterioscopy

Mgbe nchoputa pụta nke analysis ga-jiri ya tụnyere ndị ọzọ data: adakarị nnyocha, radiography, iteto Microscopy, akuku na ọbụna omume a kpọmkwem ọgwụgwọ ndị dị oké mkpa. Na usoro isiokwu a, na-PCR ọmụmụ bụ naanị otu n'ime mmiri. Ịchọpụta nje ahụ ná mmalite nchoputa nwere ike ịbụ mfe quickest ụzọ - bacteriological.

E na-eji a ìhè mikroskopu (agba? Ziehl-Neelsen) na fluorescent (agba? Fluorochromes). The uru bụ ọsọ iteto pụta. Ma, ya drawback na-n'ụzọ ziri ezi na-atụle ole na ikike ruru ala uche. Otú ọ dị, usoro a na-nyere WHO nkwanye dị ka ndị kasị echekwa na n'ala ịchọpụta ụkwara nta ọrịa. Nchọpụta nke mycobacteria bacteriological usoro nwere amụma uru ma na-eme atụmatụ quantitatively nje excretion. Ọtụtụ ihe ndị ọzọ obi ike na-emeso ya molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa research ụzọ nke ụkwara nta.

omenala

Mma nchọpụta nke mycobacteria mara omenala ọmụmụ. Agha mkpụrụ enweghị nchịkwa ihe e mere ya n'ime egg-ajụ: Mordovsky, Finn II, LJ, na dị ka. Benchmarks nke iguzogide nke mycobacteria ka ọgwụ na-apụtachaghị ìhè na-egosi na irè nke a ọnụ ọgụgụ nke mycobacteria na ha chịrị na vitro, ma ọ bụrụ na-etinyere usoro nnyocha omenala. Ntọt pasent nke mwepu nke mycobacteria Inoculation nke enweghị nchịkwa ihe a na ẹkenịmde ke multiple gburugburu.

Nzute mkpa nke ọtụtụ omenala, nje gụnyere Grant na oke mmiri. Ji usoro a na-akpaghị aka metering ụdị VANTES ibu. Crops ga-ẹkenịmde ke incubation maka ruo asaa na asatọ izu. Site na nke a oge ihe akuku na enweghị ibu nwere ike na-atụle na-adịghị mma. The kasị dị irè ụzọ chọpụta Mycobacterium ụkwara nta tụlee ndu samples: achọpụta ọrịa ihe ife efe nchọpụta, nke bụ oké susceptible ka TB.

ụfọdụ ọnụ ọgụgụ

Nti ubi nke ọmụmụ, nke e meghere site PCR nchọpụta nsogbu bụ na-amụ M. ụkwara nta - latent ọrịa. The oge a echiche nke TB ọrịa na-egosi na nke a narị mmadụ bụ ndị na kọntaktị na M. ụkwara nta, ọgu anọ na iri-ike nke ọma ga-oria, ma naanị iri n'ime ha na-arụsi ọrụ ọrịa a na-mepụtara. Ndị ọzọ nwere TB ọgụ, na n'ihi na ọgu anọ na iri percent nke ikpe na ọrịa na-anọgide latent. Ịchọpụta a ụkpụrụ ya enyerela a molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa usoro.

Geneticists na-ekwu na iri ise na ise pasent ndị ubi enweghị nchịkwa ihe onwunwe ndị na-adịghị mma, na iri asatọ percent nke ndị mmadụ na-oria na M. ụkwara nta, ma-eru na ọ dịghị radiographic ngosipụta nke ọrịa, PCR mma Ibọrọ natara. Ọ bụ mkpụrụ ndụ ihe nketa na-achọpụta ọrịa usoro aka mata ọrịa na n'ihe ize ndụ site PCR ọmụmụ, na ihe ndị ha chọpụtara (Microscopy na omenala) na-adịghị mma, na subclinical ọrịa M. ụkwara nta ya nọ ya.

oge a na-eme nnyocha

The Russian Federation na bacteriological laboratories na-eji ihe ngwa ngwa usoro nke zuru kasịnụ: nitrate reductase ọrụ nke mycobacteria nwalere site Griess reagent. Anti-TB emmepe-eji ụzọ na-enye ohere ikpebi ọgwụ eguzogide. Nke a seeding na mmiri mmiri media, ebe akpaghị aka radiometric na fluorescent ajụjụ usoro uto nke mycobacteria. Dị otú ahụ analysis a na-eme ngwa ngwa - ruo izu abụọ.

Ugbu a, ụzọ ọhụrụ ndị a na-mepụtara: ọgwụ na-eguzogide nke mycobacteria tụrụ na genotype larịị. Study nke molekụla usoro nke iguzogide ọrịa na-egosi na ọnụnọ ke mycobacteria. Ndị a mkpụrụ ndụ ihe nketa na-metụtara iguzogide ọgwụ ụfọdụ. Ka ihe atụ, kasA mkpụrụ ndụ ihe nketa, inhA, katG eguzogide isoniazid, rpoB site n'usoro - rifampicin 16Sp RNA mkpụrụ ndụ ihe nketa na rpsL - streptomycin, emb1 - ka ethambutol, gyrA - a fluoroquinolone na na.

mmụba

The oge a nchoputa budata ụba molekụla-mkpụrụ ndụ ihe nketa larịị usoro maka ịmụ DNA na-ekwe na-ebu nnukwu-ọnụ ọgụgụ ọmụmụ nke mmụba na ha nile ụdịdị dị iche iche. Ugbu a anyị maara na ihe ndị kasị mmụba na 516, 526 na 531 codons na rpoB site n'usoro, na kwuru na ọ bụ ndị na-eguzogide iche iche ọgwụ ọjọọ. E nwere a dum nso nke ụzọ maka dee nke mycobacteria eji ọ bụghị nanị na omenala ụzọ - Biochemical, ndu na omenala, ma n'ọtụtụ ebe na oge a na molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa usoro. Ugbua e nwere ezigbo na-enye ihe na-arịa usoro maka nchọpụta nke monogenic ọrịa. Ha na-dabere na DNA ọmụmụ kpọmkwem ebe nke a akpan akpan site n'usoro. Nke a bụ na-emekarị a mgbagwoju usoro, na-ewe oge na oké ọnụ, ma ndị data na-nyere site molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa analysis, bụ ihe ndị ọzọ ezi ihe na ihe ọmụma karịa data niile ọzọ nyochara.

Ọ dịwo mara na DNA adịghị agbanwe maka dum ndụ nke organism na ọ bụ ihe ọ bụla nucleated mkpụrụ ndụ odnakova, na nke a na-eme ka o kwe omume na-analysis of nnọọ niile mkpụrụ ndụ nke ahụ, n'oge ọ bụla na ogbo nke ontogeny. The mebiri emebi site n'usoro nwere ike achọpụtara tupu ọdịdị nke mbụ mgbaàmà na-ọnụ ọgụgụ na-adakarị ọrịa, nakwa dị ka na ike heterozygous ndị mmadụ, ma na-enwe a mutation na site n'usoro. Molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa ọrịa e ketara eketa na-achọpụta ọrịa ụzọ ekwe na-ekpughe ya (kpọmkwem obibia, DNA-nchọpụta nsogbu), nakwa dị ka inyocha ihe segregation nke ọrịa na ezinụlọ na welara loci DNA (mkpụrụ ndụ ihe nketa polymorphisms), nke nwere njikọ chiri anya na a mebiri emebi site n'usoro (ie, na anọ obibia nke DNA-nchọpụta nsogbu). Kpọmkwem ma ọ bụ n'ụzọ - bụla DNA nchọpụta nsogbu dabeere na ụzọ nke ịmata a nditịm kọwaa òkè nke mmadụ DNA.

kpọmkwem ụzọ

Direct ụzọ nke DNA nchoputa bụ mgbe onye mere site n'usoro ọrịa e ketara eketa na-mara, dị ka a maara nke ọma, na ụdị nke ya mmụba. Dị ka ihe atụ, a kwesịrị ekwesị kpọmkwem ụzọ na a ọnụ ọgụgụ nke ọrịa. Nke a Huntington si chorea (ndọtị CTG-akuko), phenylketonuria (R408W), cystic fibrosis (delF508, isi mmụba) na dị ka. Ndị isi uru nke kpọmkwem usoro bụ a kpam-ekesịpde achọpụta ọrịa ziri ezi, na ọ dịghị mkpa ime a DNA analysis of ndị ọzọ nke ezinụlọ. Ọ bụrụ na a mutation na kwekọrọ ekwekọ site n'usoro na-achọta, ọ na-enye ohere kpọmkwem mma a nchoputa nke si n'aka ruo n'aka, genotype mkpebi siri ike na ndị ọzọ nke anyịgbu ezinụlọ.

Ọzọ uru nke kpọmkwem nchoputa a na-ewere iji mata a heterozygous ụgbọelu nke ọjọọ mmụba si ikwu na ndị nne na nna bụ ndị nwụrụ si ọrịa. Nke a bụ eziokwu karịsịa n'ihi ọrịa autosomal recessive. Ụkọ ihe ụfọdụ nke kpọmkwem ụzọ na-dị. Itinye ha, i kwesịrị ịmata kpọmkwem localize ọrịa ntutu ịdapụsị site n'usoro, exon-intron Ọdịdị nke ya ụdịdị dị iche iche na ya mmụba. Ọ bụghị ihe niile monogenic ọrịa taa natara ihe ọmụma dị otú. Informativeness kpọmkwem ụzọ pụrụ-atụle zuru ezu, n'ihi na otu na otu mkpụrụ ndụ ihe nketa nwere ike dị ukwuu nke enweghị nchịkwa mutation na-akpata mmepe nke butere n'aka ọrịa.

anọ ụzọ

Anọ ụzọ na DNA nchọpụta nsogbu na-eji mgbe niile, na ndị ọzọ, ma ọ bụrụ na ndị mebiri emebi site n'usoro na-na-mata, ma naanị chromosomally, ma ọ bụ ma ọ bụrụ na akara nchoputa enyeghị n'ihi (ọ na-eme, ma ọ bụrụ na site n'usoro mgbagwoju molekụla nzukọ ma ọ bụ a ukwuu, ma ọ bụrụ na e nwere ọtụtụ enweghị nchịkwa mmụba). Anọ ụzọ rụrụ segregation analysis of polymorphic nrịbama na allelic ezinụlọ. Nrịbama hụrụ na otu chromosomal region ma ọ bụ locus nwere njikọ chiri anya na ọrịa na-anọchi anya deletions ma ọ bụ insertions, mgbe substitutions, akuko, na ha polymorphism bụ n'ihi na dị iche iche ego nke mkpụrụ ndụ na ngọngọ.

Kasị adaba maka anọ nchoputa atụle microsatellite na minisatellite polymorphisms, nke na-ekesa na chromosome mmadụ. ha bara uru kwupụtara na elu ọmụma ọdịnaya, ma ọ bụrụ na mmebi nke mkpụrụ ndụ ihe nketa anya n'etiti welara na site n'usoro adịghị kwa nnukwu. Na nke ikpeazụ ahụ, ziekwa ezi kpebisiri ike ruo n'ókè dị ukwuu ugboro nke recombination n'etiti polymorphic welara na emebi. Anọ achọpụta ọrịa ụzọ-enye amanyere bụ iwu nke mbido nzọụkwụ nke allele frequencies nke nyochaa bi ọmụmụ n'etiti ndị ọrịa na-ebu ihe ndị na mmụba, plus mkpa nke na-ekpebi ihe gbasara nke puru nke recombination nke nonequilibrium na adhesion nrịbama na mmụba alleles.

ụzọ ndị ọzọ

Short agba nke RNA ma ọ bụ DNA, nakwa dị ka otu mkpụrụ ndụ ihe nketa visualized n'okpuru microscopic ọmụmụ nwere ike ịbụ, ya mere, ka a mata na mmụba mkpa site molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa nchoputa. E nwere a "Human chromosome Project", nakwa dị ka ndị ọzọ ọganihu molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa nke ukwuu gbasaa ekwe omume nke nchoputa nke butere n'aka ọrịa - ma pre- na postnatal. Ndị a ụzọ pụrụ inye oge mbụ nchọpụta na-eme ka a amụma poly- na monogenic ọrịa, onye mpụta mbụ na-ewe ebe toro. N'ụzọ dị mwute, n'ihi na oru ike nke molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa ọmụmụ bụ mgbe ụfọdụ n'ofè ụkpụrụ ókè na-setịpụrụ na mmekọrita nketa, karịsịa mgbe nchoputa bụ na-eto eto na nwata.

Structural na space chromosomal abnormalities bụ ndị kasị akpata ọrịa na cancer, na ọtụtụ malformations. Chromosomal ọhụrụ mkpa ka a mata, nke dị mkpa maka ezinụlọ ndụmọdụ - na-amata ndị amụma, na omumu ihe ize ndụ na-eme n'ọdịnihu, ime ọkwà. Chromosome analysis bụ "gold ọkọlọtọ" nke mkpụrụ ndụ ihe nketa nchoputa, ma ọ bụ ókè. Naanị ụzọ nke molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa analysis nwere ike ime ihe, n'ihi na e ji mee ihe cloning technology dabeere fluorescent kpọọ ike nke na ha elu uche mata aghụghọ chromosomal mgbanwe na-agaghị ekwe ịchọpụta oge gboo cytogenetic ọmụmụ. A usoro na-esiwanye ịgbasa anyị achọpụta ọrịa ike, mgbe na-enyocha, ụmụaka na otito nkwarụ,-eme iberibe, na ọtụtụ ndị ọzọ butere n'aka ọrịa.

Nchoputa

Ọ dị ezigbo mkpa maka umu mmadu bu site n'usoro Ọdịdị na ọrụ nke ihe ọmụma, na ụdị mgbanwe, ikike ịchọpụta butere n'aka ọrịa nke mere na njikọ na mmepe nke molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa. ya ụzọ na-iji na-amụ ihe nke DNA molekul - na mgbe bụ nkịtị, na mgbe ọ na-mebiri emebi. Nkwadebe nke deoxyribonucleic acid usoro nke nucleotides (DNA) gbatịrị na nkebi si anata n'omume mata onye iberibe. Mwepu nke genomic DNA si mkpụrụ ndụ, mmachi (na-adọgbu adọgbu), amplification (cloning), electrophoresis nke iberibe (kewara ha electric ụgwọ na molekụla ibu site agarose jel). Identification nke kpọmkwem iberibe dị n'elu a pụrụ iche straipu.

Mgbe ahụ na-adaba omume pụrụ iche nzacha, site na nke na-aga nke ọ bụla ibe akwụkwọ hybridization na cloned DNA iberibe ma ọ bụ sịntetik redioaktivu-eme Nchoputa Banyere bụ a akara, nke ga-hà ọ bụla ule sample. Ọ bụrụ na ị na-agbanwe ọnọdụ ma ọ bụ ogologo tụnyere na nyocha, ma ọ bụrụ na a ọhụrụ iberibe ma ọ bụ okụrede - niile a na-egosi na nyochara na-egosi site n'usoro agbanweela nhazigharị na nucleotide usoro. E nwere asatọ isi usoro nke molekụla mkpụrụ ndụ ihe nketa ọmụmụ: sequencing (mkpebi siri ike nke DNA usoro), polymerase yinye mmeghachi omume (na-abawanye na ọnụ ọgụgụ nke usoro), na njikere nke primers mara mkpụrụ ndụ ihe nketa, DNA cloning, mmepụta nke recombinant ụmụ irighiri ewepụtara na-edozi n'ihi recombinant ụmụ irighiri, eke a zuru set (collection ọbá akwụkwọ) cloned iberibe na e nwetara site na iji mmachi.